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烟草烟囱病毒诱导本氏烟草基因沉默分析的适宜对照载体的构建
烟草烟囱病毒诱导本氏烟草基因沉默分析的适宜对照载体的构建
程维奇徐曲芳李辉徐友平蔡新忠
[摘要]空载体pYL156(pYL156:00)是烟草战病毒诱导基因沉默实验(TRV)最常用的对照载体,在番茄和烟草天然植物中沉默。增长效应
结果表明,沉默pYL156:00和本塞姆氏烟草后的两种番茄均表现出严重的全身病毒症状,并且生长受到显着抑制。因此,pYL156 :: 00是番茄和N.V.用于诱导TRV。它不是本塞姆氏体的基因。用于沉默分析的良好控制载体。为了获得更好的对照载体,通过将253bp的亚硝酸盐分别插入载体pYL156:00的多克隆位点构建两个新的对照载体pYL156:NIRi和pYL156 :: eGFP。将还原酶基因和400bpe GFP基因片段的内含子序列以及两种对照载体对病毒症状和沉默后本塞姆氏烟草植物生长的影响与pYL156:00进行比较。
结果,沉默后用pYL156:00处理的植物显示出更严重的全身性病毒症状,其中26个中的生长受到显着抑制。
7%的植物被杀死并且植物用pYL156处理:NIRi沉默也显示出明显的病毒症状和生长抑制,但其效果低于pYL156:00,仅13这是。
虽然3%的植物被杀死,但用pYL156 :: eGFP处理的植物没有显示出明显的病毒症状,并且植物生长没有受到显着影响。病毒积累的结果表明,用三种对照载体处理的植物的症状和生长受到抑制,并且这种情况与植物中TRV病毒积累的水平密切相关。
这些结果表明,新构建的pYL156 :: eGFP可用作TRV诱导的基因沉默分析的优良对照载体。
作者单位:
浙江大学生物技术研究所;浙江大学分析测试中心浙江大学农业部文化与分子生物学实验室;[基金]:国家基础研究计划项目(否)。
2009 CB119000)
遗传改良的有机农业育种主要项目(不。
2009 ZX08009-044B)
大学新的卓越中心计划(不是。
NCET-08-0485)
NewCentorno 151 Talentos de ZhejiangProvince项目
中国国家科学基金会(No.
30871608和30771406)[类别编号]:Q943。
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